基因测序

　　基因测序技术作为现代生命科学的核心工具，已经从实验室研究走向临床诊断和个性化医疗，深刻改变了人类对生命本质的认识和疾病诊疗方式。

1.基因测序技术的基本原理
　　基因测序技术的核心目标是确定DNA分子中四种碱基（A、T、C、G）的排列顺序，这一信息承载着生物体的全部遗传指令。自1977年Frederick Sanger发明双脱氧链终止法（一代测序）以来，基因测序技术经历了三次革命性飞跃，每次革新都使测序通量呈指数增长而成本大幅下降。
一代测序（Sanger法）原理
　　双脱氧链终止法作为第一代测序技术的代表，其核心在于使用2',3'-双脱氧核苷酸（ddNTP）作为DNA链延伸的终止剂。
二代测序（NGS）原理
　　二代测序技术的革命性突破在于将DNA片段固定在固体表面，通过大规模并行反应实现超高通量测序。
三代测序原理
　　三代测序技术的本质特征是单分子实时测序，无需PCR扩增，可直接检测天然DNA分子。
2.测序技术的关键性能指标
　　基因测序技术的发展驱动力主要来自人类基因组计划和大规模群体基因组研究的需求。测序技术从大型研究中心进入普通实验室和临床机构，催生了癌症基因组学、微生物组学、单细胞测序等新兴领域。
测序技术的关键性能指标包括：
　　读长：单次测序获得的连续碱基数，长读长有利于基因组拼接和结构变异检测；
　　准确率：碱基判读的正确概率，临床应用通常要求>99.9%；
　　通量：单次运行产生的数据量，决定项目规模和成本；
　　读深：基因组区域的平均覆盖次数，影响变异检测灵敏度。不同应用场景对这些指标有不同侧重，如肿瘤突变筛查需要高准确度和适中读深（30-100X），而新基因组组装则需要长读长和高通量。
　　随着测序技术成熟，多组学整合和实时分析成为新趋势。将DNA测序与转录组（RNA-seq）、表观组（ChIP-seq）、蛋白质组（质谱）数据关联分析，可全面解析基因型－表型关系。Oxford Nanopore等实时测序技术则支持在数据生成过程中即时分析，在传染病快速诊断和野外生物监测中展现出独特优势。未来，量子测序、电子显微镜测序等第四代技术可能进一步突破现有局限，实现更快速、更经济的基因组解码。
3.DNA测序的工作流程
　　尽管技术原理各异，现代测序实验通常遵循类似的标准流程：
3.1 样本制备：从血液、组织等样本中提取高质量DNA/RNA，必要时进行全基因组扩增。
3.2 文库构建：将DNA片段化（超声或酶切），末端修复后连接测序适配器，可能包括大小选择和PCR富集。靶向测序还需进行杂交捕获或扩增子PCR。
3.3 簇生成/模板制备：二代测序通常需要体外扩增生成足够信号，如桥式PCR(Illumina）或乳液PCR(Ion Torrent）；三代测序则可直接使用原始DNA分子。
3.4 测序反应：根据平台特性运行相应化学反应，从数小时（Ion Torrent）到数天（HiSeq X）不等。
3.5 数据分析：原始图像或信号转换为碱基序列（碱基识别），然后进行质量过滤、比对参考基因组、变异检测等下游分析。
4.基因测序技术的应用领域
　　基因测序技术通过分析DNA或RNA的碱基序列已渗透到生命科学和医学的各个领域，从基础研究到临床应用，从人类健康到农业育种，其广泛而深入的应用正持续推动相关领域的革命性进展。
　　典型应用领域包括医学诊断与健康管理、科研与基础研究、农业与生物工程、法医与个体识别、药物开发与个体化用药、技术发展与新兴应用等。

5.CNI典型的基因测序光源
　　目前，大多数 DNA 测序方法依赖于激光荧光技术，用不同的荧光染料来表达四种不同的核苷酸 (ACGT）。典型需求为二波长和四波长合光组合，CNI有丰富的波长选择匹配每个荧光标记的最大吸收峰，典型波长有320nm、335nm、349nm、355nm、365nm、375nm、405nm、430nm、450nm、473nm、488nm、515nm、532nm、561nm、577nm、589nm、633nm、639nm、670nm、690nm等，功率从百mW到数W档可供选择。
　　另外，基因测序系统还常用到LED多波长组合光源。典型波长为365nm、385nm、405nm、440nm、460nm、470nm、480nm、525nm、527nm、555nm、579nm、590nm、630nm、650nm、730nm和白光光源等。详细指标，可到www.cnilaser.com了解。
　　通常完成一次完整的基因测序，通常需要数十小时，所以对激光器的波长和功率长期稳定性有非常严格的要求。一般要求100小时以上的rms稳定性优于1%，同时要求光谱纯净度，激光波段截止满足OD值大于5。定制光斑的均匀光场输出，均匀度优于90%。